環(huán)境因素、操作因素、實驗方法或者患者自身因素等都可能造成假陽性檢測結(jié)果。以梅毒檢測為例,分析造成假陽性的普遍原因:
梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,常見的是梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(PA)和梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),PA已經(jīng)確定為美國疾控中心的標(biāo)準(zhǔn)方法。ELISA因其操作方便,結(jié)果較為準(zhǔn)確,價格低廉在國內(nèi)還受到廣泛的使用。梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,無臨床癥狀和疾病接觸史可出現(xiàn)假陽性,其主要原因有以下幾點: 1.標(biāo)本因素
1.1標(biāo)本處理不完全:血液標(biāo)本未完全抗凝即開始離心,析出的纖維蛋白易在孔板中形成白色薄膜或者絮狀物,若清洗不干凈,殘余在孔板中極易使吸光度值偏高,造成假陽性。
1.2標(biāo)本溶血:血液樣本溶血后細(xì)胞內(nèi)的各種酶和具有酶樣活性的物質(zhì)可與底物非特異性結(jié)合,標(biāo)本溶血時細(xì)胞內(nèi)液的各種活性酶及具有酶樣活性的物質(zhì)可與底物非特異性結(jié)合;溶血后釋放出的血紅蛋白(Hb)具有類過氧化物酶的活性,可少量吸附于孔板上,隨著溶血程度增大而增加,在洗板不徹底的情況下從而使樣本OD值升高,造成假陽性。 1.3標(biāo)本被細(xì)菌污染:標(biāo)本采集后及分離血清時若被細(xì)菌污染,也可引起內(nèi)源性辣根過氧化物酶增多,相應(yīng)的酶標(biāo)記方法會產(chǎn)生非特異性干擾,造成假陽性。
1.4標(biāo)本保存不當(dāng):血液標(biāo)本保存過久易滋生細(xì)菌,影響檢測結(jié)果。時間過長的標(biāo)本,血清標(biāo)本IgG聚集成多聚體,AFP形成二聚體,造成假陽性。 2.使用儀器及操作因素
2.1拖帶現(xiàn)象:全自動家養(yǎng)系統(tǒng)可以準(zhǔn)確、快速加樣,避免手工的誤差也保證了加樣的一致性。但是全自動加樣儀還不能完全確保一份樣本一個加樣頭。加完樣后雖然其可以自動清洗3次,而高濃度的抗原或者抗體標(biāo)本檢測后,拖帶污染可能導(dǎo)致后面或者多孔樣本的假陽性。
2.2酶標(biāo)儀:酶標(biāo)儀進(jìn)行比色時,當(dāng)反應(yīng)板有氣泡或者污 染時,容易出現(xiàn)吸光度值升高,從而造成假陽性結(jié)果。
2.3試驗溫度:試驗溫度過高或過低都有可能引起血清蛋白異常,造成假陽性。最好在室溫18~25℃進(jìn)行操作。
2.4操作因素:操作過程中一些因素也會導(dǎo)致假陽性,檢測底物反復(fù)使用出現(xiàn)被污染或者底物受到陽光照射時間過長會出現(xiàn)假陽性;孔板洗滌過程中出現(xiàn)溢出現(xiàn)象,陽性標(biāo)本的反應(yīng)液污染臨近孔板造成假陽性;洗滌過程中洗滌時間太短或次數(shù)太少,洗滌不充分導(dǎo)致酶制劑殘留形成假陽性。
3.個人因素
3.1生理機(jī)能:ELISA試劑盒主要是通過抗原抗體檢測梅毒螺旋體,理論上ELISA的位點少,結(jié)果更具特異性,但由于人血清抗原中存在假陽性位點的問題,造成假陽性。老年人身體機(jī)能退化,易出現(xiàn)免疫功能異常,產(chǎn)生乙烯異常蛋白干擾檢測結(jié)果。
3.2疾病:老年人長伴有各種疾病,如腸癌、肺癌、腹腔內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤,肺結(jié)核,血液病,自身免疫性疾病,可以導(dǎo)致患者自身免疫環(huán)境的改變,或者糖尿病、腫瘤、肝病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)含有治療性抗體、糖尿病抗體、類風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等,使底物出現(xiàn)顯色反應(yīng),造成假陽性結(jié)果。 4.方法學(xué)因素
4.1灰?guī)^(qū)現(xiàn)象
ELISA是一種定性檢測梅毒的方法,在陽性與陰性之間有一條分界線,即判定值,通常在判定值左右有一定的范圍,為灰?guī)^(qū)。結(jié)果位于灰?guī)^(qū)的標(biāo)本易出現(xiàn)假陽性,需要重新檢測確定是否為陽性。
4.2空白對照的影響
空白對照組對結(jié)果具有很大的影響,比如反應(yīng)孔出現(xiàn)刮痕,可使測定值升高,不設(shè)定對照組也可出現(xiàn)誤讀形成假陽性。