纖維素酶是能將纖維素水解成葡萄糖的一組酶的總稱,來源廣泛,主要包括微生物來源、植物來源和動物來源纖維素酶。
1、微生物來源的纖維素酶
能分泌纖維素酶的微生物主要有霉菌、擔子菌等真菌,也包括細菌、放線菌和一些原生動物。目前,人們研究的纖維素酶主要來自于細菌和絲狀真菌(Wood,1992;Bhat和Bhat,1997)。細菌主要有纖維黏菌、生孢纖維黏菌和纖維桿菌等,但由于細菌分泌的纖維素酶量少(低于0.1 g/L),同時產生的酶屬胞內酶或者吸附于細胞壁上,故很少用細菌作纖維素酶的生產菌種。絲狀真菌則能較大量地產生纖維素酶,且能分泌到細胞外,屬胞外酶,這有利于酶的提取。 利用微生物生產纖維素酶的研究開展較早。早期許多研究集中在利用綠色木霉(、康氏木霉、青霉等嗜溫好氧真菌產纖維素酶。對纖維素作用較強的菌株多是木霉屬、青霉屬、曲霉屬和枝頂孢霉的菌株,特別是綠色木霉及其近緣的菌株。目前飼用纖維素酶主要來源于綠色木霉、李氏木霉、根霉、青霉、嗜纖細菌、側孢菌等,其中綠色木霉應用最為廣泛。 2、植物來源的纖維素酶
植物可以產生纖維素酶的觀點早已被人們所認識和接受。在植物中,纖維素酶在植物發(fā)育的不同階段發(fā)揮著水解細胞壁的作用,如果實成熟、蒂柄脫落等過程。柴國花等(2006)采用RT-PCR檢測培養(yǎng)4周的大豆幼苗的5個不同組織:嫩葉、老葉、莖、離層和根,測得脫落纖維素酶基因的表達量互不相同,離層中表達量最高,莖中表達量最低。同時選取表達量最高的離層作為逆境處理材料,分別用高溫、干旱、鹽處理不同時問后,檢測脫落纖維素酶基因的時間表達模式,結果表明:3種逆境條件下,脫落纖維素酶基因的時間表達模式各不相同,但總的來說,高溫能抑制脫落纖維素酶基因的表達,干旱和鹽都能促進脫落纖維素酶基因的表達。目前關于谷物性飼料中是否存在纖維素酶及其對畜禽消化影響的研究并不多見.對植物源纖維素酶的酶活及其調控研究將有助于研究植物源和微生物源纖維素酶的差異并進一步開發(fā)高效纖維素酶菌種。
3、動物米源的纖維素酶
動物來源纖維素酶包括在動物消化道內寄生微生物分泌的纖維素酶和動物自身分泌的纖維素酶。反芻動物依靠瘤胃微生物可消化纖維素,因此可以利用瘤胃液獲得纖維素酶的粗酶制劑。張曉華等(1995)報道了一個厭氧中溫分解纖維素的瘤胃梭菌新種。Nakashima等(2000)從白蟻體內分離到一種相對分子質量為48000的內切β-1,4-葡聚糖酶。王驥(2003)從福壽螺體內分離得到一種同時具有外切β-1,4-葡聚糖酶、內切β-1,4葡聚糖酶和內切北塔-1,4一木聚糖酶3種酶活性,相對分子質量為41500的多功能纖維素酶,同時在福壽螺的卵母細胞中獲得了編碼該酶的基因。上述研究證實動物自身可分泌內源性纖維素酶,這可能是動物在進化過程中對自然環(huán)境的適應性選擇,對高等動物豬、雞等而言自身分泌的纖維素酶有限。 4、液體發(fā)酵產纖維素酶
液體發(fā)酵的突出優(yōu)點是便于控制污染,尤其是目前常用的液體深層發(fā)酵技術,另外就是產生的纖維素酶純度高、便于濃縮成高濃度的產品。液體發(fā)酵節(jié)省勞動力、適合于大規(guī)模工業(yè)化生產,但大規(guī)模生產時,發(fā)酵罐的攪拌槳不停地攪拌耗能是相當巨大的。液體發(fā)酵的培養(yǎng)周期長,至少長達7~8 d,更多的長達11 d以上(丹尼爾等,1984)。
5、固體發(fā)酵產纖維素酶
固體發(fā)酵的基本流程是:菌種平板一搖瓶一種曲一固體發(fā)酵。固體發(fā)酵產纖維素酶的特點是:由于發(fā)酵條件更接近自然環(huán)境狀態(tài)下的微生物生長習性,使得其產生的酶系更全面,有利于降解天然纖維素;在設備、耗能、投資、生產成本方面國內外許多丁-廠的建立已說明比液體發(fā)酵優(yōu)越得多;固體發(fā)酵不需攪拌,培養(yǎng)周期短,只培養(yǎng)3 d,且在不含游離水的條件下培養(yǎng),水分為75%。但是,固體發(fā)酵比液體發(fā)酵較難控制污染,不過隨著近幾年技術發(fā)展,固體發(fā)酵污染相對較難控制的問題,已得到很大的改進。
我們在2004年的研究中分別選擇了1種固體發(fā)酵纖維素酶和2種液體發(fā)酵纖維素酶,均來源于真菌。比較而言,固體發(fā)酵獲得CMCase活力較高,但總的FPase反而液體發(fā)酵較高;此外,液體發(fā)酵來源纖維素酶具有比固體發(fā)酵更好的穩(wěn)定性,表現在抗逆性和熱穩(wěn)定性等方面(黃燕華,2004)。